Могойн хор нь карбоксил эфирийн холбоог гидролиз болгодог фермент агуулдаг.Гидролизийн субстрат нь фосфолипид, ацетилхолин, ароматик ацетат юм.Эдгээр ферментүүд нь фосфолипаза, ацетилхолинэстераза, аромат эстераза гэсэн гурван төрлийг агуулдаг.Могойн хорд агуулагдах аргинин эстераза нь мөн синтетик аргинин эсвэл лизиныг гидролизлэх чадвартай боловч байгаль дээрх уургийн пептидийн холбоог голчлон гидролиз болгодог тул протеазад хамаардаг.Энд авч үзсэн ферментүүд нь зөвхөн эфирийн субстрат дээр үйлчилдэг бөгөөд пептидийн холбоонд нөлөөлж чадахгүй.Эдгээр ферментүүдийн дотроос ацетилхолинэстераза ба фосфолипазагийн биологийн үйл ажиллагаа илүү чухал бөгөөд бүрэн судлагдсан байдаг.Зарим могойн хор нь р-нитрофенил этилийн эфир, a - эсвэл P-нафтален ацетат, индол этилийн эфирийг гидролизлэх хүчтэй үнэрт эфиразын идэвхжилтэй байдаг.Энэ үйл ажиллагаа нь бие даасан ферментээр үүсгэгддэг үү эсвэл карбоксилэстеразын мэдэгдэж буй гаж нөлөө, биологийн ач холбогдол нь тодорхойгүй хэвээр байна.Agkistrodon halys Japonicus-ийн хорыг p-нитрофенил этилийн эфир ба индол этилийн эфиртэй урвалд оруулахад p-нитрофенол ба индол фенолын гидролизатууд илрээгүй;Эсрэгээр, эдгээр эфир нь кобра Жоушань дэд зүйл могойн хор, Bungarus multicinctus могойн хортой урвалд орвол хурдан гидролиз болно.Эдгээр кобра хор нь хүчтэй холинэстеразын идэвхжилтэй байдаг нь дээрх субстратын гидролизийг хариуцдаг болохыг мэддэг.Үнэндээ Mclean et al.(1971) Кобрагийн гэр бүлд хамаарах олон могойн хор нь индол этилийн эфир, нафталин этилийн эфир, бутил нафталин эфирийг гидролиз болгож чаддаг гэж мэдээлсэн.Эдгээр могойн хорнууд нь: кобра, хар хүзүүт кобра, хар уруултай кобра, алтан кобра, Египетийн кобра, хаан кобра, алтан кобра мамба, хар мамба, цагаан уруултай мамба (Д.ав одоо ч зүүн ромболын хоржигнуурт могойг мэддэг.
Могойн хор нь сийвэн дэх холинэстеразын идэвхийг тодорхойлох субстрат болох метил индол этилийн эфирийг гидролизлэх чадвартай боловч энэ могойн хор нь холинэстеразын идэвхийг харуулдаггүй.Энэ нь кобрагийн хорд холинестеразаас ялгаатай үл мэдэгдэх эстераза байдгийг харуулж байна.Энэ ферментийн мөн чанарыг ойлгохын тулд цаашид салгах ажил шаардлагатай.
1, фосфолипаза А2
(I) Тойм
Фосфолипаза нь глицерил фосфатын гидролиз хийх чадвартай фермент юм.Байгальд 5 төрлийн фосфолипаза байдаг ба фосфолипаза А2 ба фосфолипаза
A., фосфолипаза В, фосфолипаза С, фосфолипаза D. Могойн хор нь голчлон фосфолипаза А2 (PLA2) агуулдаг бол цөөхөн могойн хорд фосфолипаза В, бусад фосфолипаза нь гол төлөв амьтны эд, бактерид агуулагддаг.3-11-4-т эдгээр фосфолипазагийн субстратын гидролизийн үйл ажиллагааны газрыг харуулав.
Фосфолипаза дотроос PLA2 илүү их судлагдсан.Энэ нь могойн хорд хамгийн их судлагдсан фермент байж магадгүй юм.Түүний субстрат нь Sn-3-глицерофосфатын хоёр дахь байрлал дахь эфирийн холбоо юм.Энэ фермент нь могойн хор, зөгий хор, хилэнцэт хорхойн хор, амьтны эд эсэд өргөн тархсан ба PLA2 нь дөрвөн овгийн могойн хорд элбэг байдаг.Энэ фермент нь цусны улаан эсийг задалж, цус задрал үүсгэдэг тул үүнийг бас "гемолизин" гэж нэрлэдэг.Зарим хүмүүс мөн PLA2 цус задралын лецитиназа гэж нэрлэдэг.
Людике эхлээд могойн хор нь лецитин дээр ферментийн нөлөөгөөр үйлчилж цус задлагч нэгдэл үүсгэдэг болохыг олж мэдсэн.Дараа нь Делезенне нар.кобрагийн хор нь морины ийлдэс эсвэл шар дээр үйлчлэхэд цус задлагч бодис үүсгэдэг болохыг баталсан.PLA2 нь эритроцитын мембраны фосфолипид дээр шууд үйлчилж, эритроцитийн мембраны бүтцийг устгаж, шууд цус задралд хүргэдэг нь одоо мэдэгдэж байна;Энэ нь цусны улаан эсэд нөлөөлж шууд бус цус задрал үүсгэдэг цус задлагч лецитин үйлдвэрлэхийн тулд ийлдэс эсвэл нэмсэн лецитин дээр ажилладаг.Хэдийгээр PLA2 могойн хорны дөрвөн гэр бүлд элбэг байдаг ч янз бүрийн могойн хор дахь ферментийн агууламж арай өөр байдаг.Шуурхай могой (C
Могойн хор нь зөвхөн сул PLA2 идэвхийг харуулсан.Хүснэгт 3-11-11-д Хятад дахь хорт могойн 10 гол хорын PLA2 идэвхжилийн харьцуулалтыг үзүүлэв.
Хүснэгт 3-11-11 Хятад дахь 10 могойн хорын фосфолипаза VIII үйл ажиллагааны харьцуулалт
Могойн хор
Өөх ялгаруулах
Алифат хүчил,
Цжумол/мг)
Цус задралын идэвхжил CHU50/^ г * мл)
Могойн хор
Өөх тосны хүчлийг суллана
(^раол/мг)
Цус задралын идэвхжил "(HU50/ftg * 1111)
Нажанажа атра
9. 62
арван нэгэн
Micracephal ophis
таван оноо нэг тэг
калыспаллас
8. 68
хоёр мянга найман зуу
gracilis
V, цочмог
7. 56
* * #
Офиофаг Ханна
гурван оноо найман хоёр
зуун дөчин
Bnugarus fasctatus
7,56
хоёр зуун наян
B. multicinctus
нэг оноо ес зургаа
хоёр зуун наян
Могой ба Расселли
долоон цэг тэг гурав
T, салст бүрхэвч
нэг оноо найм тав
Сиаменсис
T. stejnegeri
0. 97
（2） Салгах, цэвэршүүлэх
Могойн хорд агуулагдах PLA2 агуулагдахуун их, халаалт, хүчил, шүлт, денатурат зэрэгт тогтвортой байдаг тул PLA2-г цэвэрлэж, ялгахад хялбар байдаг.Нийтлэг арга бол эхлээд түүхий хор дээр гель шүүлтүүрийг хийж, дараа нь ион солилцооны хроматографи хийх ба дараагийн алхамыг давтаж болно.Ион солилцооны хроматографийн дараа PLA2-ийг хөлдөөж хатаах нь бөөгнөрөл үүсгэх ёсгүй гэдгийг тэмдэглэх нь зүйтэй, учир нь хөлдөөх хатаах процесс нь систем дэх ионы хүчийг ихэсгэдэг бөгөөд энэ нь PLA2-ийг нэгтгэх чухал хүчин зүйл болдог.Дээрх ерөнхий аргуудаас гадна дараах аргуудыг ашигласан болно: ① Wells et al.② PLA2-ийн субстратын аналогийг холбогдох хроматографийн лиганд болгон ашигласан.Энэ лиганд нь могойн хор дахь PLA2-тай Ca2+-тай холбогдож чаддаг.EDTA-г ихэвчлэн уусгагч болгон ашигладаг.Ca2+-ийг арилгасны дараа PLA2 ба лигандын хоорондын хамаарал буурч, лигандаас салж болно.Бусад нь 30% органик уусмал эсвэл 6 моль/л мочевиныг цэвэрлэгч болгон ашигладаг.③ Кардиотоксин дахь PLA2 ул мөрийг арилгахын тулд PheiilSephar0SeCL-4B ашиглан гидрофоб хроматографи хийсэн.④ Anti PLA2 эсрэгбиеийг PLA2 дээр ойртох хроматографи хийхэд лиганд болгон ашигласан.
Одоогийн байдлаар олон тооны могойн хор PLAZ цэвэршүүлсэн байна.Ту нар.(1977) 1975 оноос өмнө могойн хорноос цэвэршүүлсэн PLA2-ийг жагсаасан. Сүүлийн жилүүдэд жил бүр PLA2-ийг ялгаж, цэвэршүүлэх талаар олон тооны нийтлэл гарч байна.Энд бид Хятадын эрдэмтэд ХАЧА-г салгаж, цэвэршүүлэхэд анхаарлаа хандуулдаг.
Чен Юанконг нар.(1981) Жэжян дахь Agkistrodon halys Pallas-ийн хорноос гурван төрлийн PLA2-ийг ялгаж, изоэлектрик цэгийн дагуу хүчиллэг, төвийг сахисан, шүлтлэг PLA2 гэж хувааж болно.Хортой байдлын дагуу төвийг сахисан PLA2 нь илүү хортой бөгөөд үүнийг пресинаптик нейротоксин Agkistrodotoxin гэж тодорхойлсон.Шүлтлэг PLA2 нь хор багатай, хүчиллэг PLA2 нь бараг хоргүй байдаг.Ву Сянфу нар.(1984) молекулын жин, амин хүчлийн найрлага, N-терминал, изоэлектрик цэг, дулааны тогтвортой байдал, ферментийн идэвхжил, хоруу чанар, цус задралын идэвх зэрэг гурван PLA2-ийн шинж чанарыг харьцуулсан.Үр дүн нь молекулын жин, дулааны тогтвортой байдал нь ижил төстэй боловч бусад талуудын хувьд мэдэгдэхүйц ялгаатай болохыг харуулсан.Ферментийн үйл ажиллагааны хувьд хүчиллэг ферментийн идэвхжил нь шүлтлэг ферментийн идэвхжилээс өндөр байсан;Хархны цусны улаан эсэд шүлтлэг ферментийн цус задралын нөлөө хамгийн хүчтэй байсан ба дараа нь төвийг сахисан фермент, хүчиллэг фермент бараг цус задрахгүй байв.Тиймээс PLAZ-ийн цус задралын нөлөө нь PLA2 молекулын цэнэгтэй холбоотой гэж таамаглаж байна.Жан Жинкан нар.(1981) Agkistrodotoxin талстыг хийсэн.Tu Guangliang нар.(1983) Фужианы Vipera rotundus-ийн хорноос 7.6 изоэлектрик цэгтэй хортой PLA-г ялгаж, цэвэршүүлсэн гэж мэдээлсэн бөгөөд түүний физик, химийн шинж чанар, амин хүчлийн найрлага, N-д 22 амин хүчлийн үлдэгдлийн дарааллыг харуулсан. -Терминал тогтоогдсон.Li Yuesheng нар.(1985) Фужиан дахь Viper rotundus-ийн хорноос өөр PLA2 ялгаж, цэвэршүүлсэн.PLA2 *-ийн дэд нэгж нь 13800, изоэлектрик цэг нь 10.4, өвөрмөц идэвхжил нь 35/xnioI/miri мг. LD5-ийг хулганад судсаар тарьсан.Энэ нь 0.5 ± 0.12 мг / кг байна.Энэ фермент нь тодорхой антикоагулянт ба цус задралын нөлөөтэй байдаг.Хортой PLA2 молекул нь 18 төрлийн амин хүчлийн 123 үлдэгдэлээс бүрддэг.Молекул нь цистеин (14), аспарагины хүчил (14), глицин (12) -аар баялаг боловч зөвхөн нэг метионин агуулдаг ба N-терминал нь сериний үлдэгдэл юм.Тугуангаар тусгаарлагдсан PLA2-тай харьцуулахад хоёр изоферментийн молекул жин, амин хүчлийн үлдэгдлийн тоо маш төстэй, амин хүчлийн найрлага нь мөн адил төстэй боловч аспарагины хүчил ба пролины үлдэгдлийн тоо арай өөр байна.Гуанси хааны кобра могойн хор нь PLA2-аар баялаг.Шу Юян нар.(1989) хорт бодисоос PLA2 ялгаж авсан бөгөөд энэ нь анхны хорноос 3.6 дахин их өвөрмөц идэвхжилтэй, 13000 молекул жинтэй, 122 амин хүчлийн үлдэгдэлтэй, 8.9 изоэлектрик цэгтэй, дулааны тогтвортой байдал сайтай.Цусны улаан эсэд үндсэн PLA2-ийн нөлөөг электрон микроскопоор ажиглахад энэ нь хүний улаан эсийн мембранд илт нөлөө үзүүлдэг боловч ямааны цусны улаан эсэд тодорхой нөлөө үзүүлэхгүй болохыг харж болно.Энэхүү PLA2 нь хүн, ямаа, туулай, далайн гахайн цусны улаан эсийн электрофоретик хурдыг тодорхой удаашруулдаг.Чен нар.Энэ фермент нь ADP, коллаген, натрийн арахидоны хүчлээр өдөөгдсөн ялтасын бөөгнөрөлийг дарангуйлдаг.PLA2-ийн концентраци 10/xg/ml~lOOjug/ml байвал ялтасын агрегацийг бүрэн дарангуйлдаг.Хэрэв угаасан ялтасыг материал болгон ашигласан бол PLA2 нь 20 мг/мл-ийн концентрацид хуримтлагдахыг саатуулж чадахгүй.Аспирин нь циклоксигеназын дарангуйлагч бөгөөд ялтас дахь PLA2-ийн нөлөөг дарангуйлдаг.PLA2 нь тромбоксан А2-г нийлэгжүүлэхийн тулд арахидоны хүчлийг гидролиз болгон ялтасын агрегацийг дарангуйлдаг.Жэжян мужид байдаг Agkistrodon halys Pallas хор үйлдвэрлэсэн PLA2-ийн уусмалын хэлбэрийг дугуй хэлбэртэй дихризм, флюресцент болон хэт ягаан туяа шингээх аргаар судалсан.Туршилтын үр дүнгээс үзэхэд энэ ферментийн үндсэн гинжин хэлхээний хэлбэр нь бусад зүйл, овгийн ижил төрлийн ферментийнхтэй төстэй, араг ясны хэлбэр нь халуунд сайн тэсвэртэй, хүчиллэг орчны бүтцийн өөрчлөлт буцах боломжтой байв.Идэвхжүүлэгч Са2+ болон ферментийн нэгдэл нь триптофаны үлдэгдлийн орчинд нөлөөлөхгүй, харин ингибитор Zn2+ эсрэгээр нөлөөлдөг.Уусмалын рН утга нь ферментийн идэвхжилд нөлөөлөх арга нь дээрх урвалжуудаас өөр юм.
Могойн хорыг PLA2 цэвэршүүлэх явцад илэрхий үзэгдэл бол могойн хор нь хоёр ба түүнээс дээш PLA2 ялгаралтын оргилуудыг агуулдаг.Энэ үзэгдлийг дараах байдлаар тайлбарлаж болно: ① изозим байгаатай холбоотой;② Нэг төрлийн PLA2 нь янз бүрийн молекул жинтэй олон төрлийн PLA2 хольц болгон полимержих бөгөөд ихэнх нь 9 000~40 000 хооронд байдаг;③ PLA2 болон могойн хорны бусад бүрэлдэхүүн хэсгүүдийн нэгдэл нь PLA2-ийг хүндрүүлдэг;④ PLA2 дахь амидын холбоо нь гидролизд ордог тул цэнэг өөрчлөгддөг.① Мөн ② могойн хор дахь PLA2 зэрэг цөөхөн тохиолдлыг эс тооцвол нийтлэг байдаг.
① ба ② гэсэн хоёр нөхцөл байдал бий.Гурав дахь нөхцөл нь PLA2-т дараах могойн хорд илэрсэн: Oxyranus scutellatus, Parademansia microlepidota, Bothrops a ^>er, Палестин могой, элсэн могой, аймшигт могой км。.
Тохиолдлын үр дүн ④ электрофорезийн үед PLA2-ийн шилжих хурдыг өөрчилдөг боловч амин хүчлийн найрлага өөрчлөгддөггүй.Пептидүүд гидролизээр задарч болох боловч ерөнхийдөө дисульфидын холбоогоор холбогддог.Зүүн хонхорт могойн хор нь PLA2-ийн хоёр хэлбэрийг агуулж байдаг бөгөөд тэдгээрийг a төрөл гэж нэрлэдэг ба PLA2 p төрөл гэж нэрлэдэг.Эдгээр хоёр төрлийн PLA2-ийн ялгаа нь зөвхөн нэг амин хүчил, өөрөөр хэлбэл нэг PLA2 молекул дахь глютаминыг нөгөө PLA2 молекул дахь глутамины хүчлээр сольдог.Энэ ялгааны тодорхой шалтгаан тодорхойгүй байгаа ч энэ нь PLA2-ийн деаминжилттай холбоотой гэж ерөнхийд нь үздэг.Хэрэв Палестины хорт могойн хор дахь PLA2-ийг түүхий хортой хамт дулаацуулж байвал түүний ферментийн молекул дахь төгсгөлийн бүлгүүд өмнөхөөсөө илүү болно.Могойн хорноос тусгаарлагдсан C-аас PLA2 нь хоёр өөр N-терминалтай, молекулын жин нь 30000. Энэ үзэгдэл нь зүүн эрдэнийн хорхойт могойн хорд PLA2-аас үүссэн тэгш хэмтэй димертэй төстэй PLA2-ийн тэгш бус димерээс үүдэлтэй байж магадгүй юм. болон баруун очир эрдэнийн ноцог могой.Азийн кобра нь олон дэд зүйлээс бүрддэг бөгөөд тэдгээрийн зарим нь ангилалд тийм ч тодорхой биш байдаг.Жишээлбэл, Кобра Гадна Каспийн дэд зүйл гэж нэрлэгддэг байсан зүйлийг одоо хүлээн зөвшөөрдөг
Үүнийг Каспийн тэнгисийн гаднах кобратай холбон тайлбарлах хэрэгтэй.Олон дэд зүйл байдаг бөгөөд тэдгээр нь хоорондоо холилдсон байдаг тул могойн хорын найрлага нь янз бүрийн эх сурвалжаас шалтгаалан ихээхэн ялгаатай бөгөөд PLA2 изозимийн агууламж өндөр байдаг.Жишээлбэл, кобрагийн хор
Наад зах нь r ^ ll зүйлийн 9 төрлийн PLA2 изозим, Каспийн кобра дэд зүйлийн хорд 7 төрлийн PLA2 изозим илэрсэн.Дуркин нар.(1981) могойн хор 18, мамба хор 3, могойн хор 5, хормойны 16, далайн могойн 3 хор зэрэг янз бүрийн могойн хор дахь PLA2 агууламж, изозимийн тоог судалжээ.Ерөнхийдөө кобрагийн хорны PLA2 идэвхжил өндөр, олон изозимтэй байдаг.Могойн хорны PLA2 идэвхжил, изозим нь дунд зэргийн байна.Мамба хор болон шуугиантай могойн хорны PLA2 идэвхжил маш бага буюу PLA2 идэвхгүй байна.Далайн могойн хорны PLA2 идэвхжил ч бага байна.
Сүүлийн жилүүдэд могойн хорд PLA2 идэвхтэй димер хэлбэрээр байдаг тухай мэдээлээгүй байна, тухайлбал дорнод ромбофорын хорхойт могой (C. могойн хор нь a ба P төрлийн PLA2 агуулдаг бөгөөд хоёулаа ижил хоёр дэд нэгжээс бүрддэг. , зөвхөн димераза байдаг
Үйл ажиллагаа.Шен нар.Мөн могойн хорны PLA2-ийн димер л ферментийн идэвхтэй хэлбэр болохыг санал болгосон.Орон зайн бүтцийг судлах нь барууны алмазан нуруутай могойн PLA2 нь димер хэлбэрээр оршдог болохыг баталж байна.Загасны идэшт нэгдэл
Могойн хор нь хоёр өөр PLA ^ Ei ба E2 байдаг бөгөөд 仏 нь димер хэлбэрээр байдаг, димер нь идэвхтэй, түүний салангид мономер нь идэвхгүй байдаг.Лу Инхуа нар.(1980) цаашид Э.Жаянти нарын физик, химийн шинж чанар, урвалын кинетикийг судалсан.(1989) могойн хорноос үндсэн PLA2 (VRVPL-V)-ийг тусгаарласан.PLA2 мономерын молекул жин нь 10000 бөгөөд үхэлд хүргэдэг, цусны бүлэгнэлтийн эсрэг, хаван арилгах үйлчилгээтэй.Фермент нь PH 4.8-ийн нөхцөлд өөр өөр молекул жинтэй полимерүүдийг полимержүүлж чаддаг бөгөөд температурын өсөлттэй холбоотойгоор полимержих зэрэг ба молекулын жин нэмэгддэг.96 ° C-т үүссэн полимерийн молекул жин 53 100 бөгөөд энэ полимерийн PLA2 идэвхжил хоёр дахин нэмэгддэг.
Шуудангийн цаг: 2022-11-18